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原位雜交儀良好的溫度控制功能,確保FISH操作更具穩定性

2022-06-24 14:59:26

熒光原位雜交技術是一種應用非放射性熒光物質依靠核酸探針雜交原理在核中或染色體上顯示核酸序列位置的方法。該技術問世與70年代中期左右,其曾多于與染色體異常的研究,近年來隨著FISH探針種類的不斷增多,使得該技術逐步應用于各種領域。該技術具有快速,安全,靈敏度高以及探針可長期保存等特點,目前已廣泛應用于細胞遺傳學,腫瘤生物學,基因定位,基因作圖,基因擴增及分子診斷等領域。


FISH,熒光原位雜交。目前廣泛應用于:


(一)基因(或DNA片段)染色體定位和基因圖譜繪制


(二)發現染色體數目與結構異常,廣泛應用于快速產前診斷


(三)血液腫瘤學


(四)實體腫瘤學

熒光原位雜交儀廠家

對于FISH操作來說,那些因素比較重要?


在FISH中很重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率;光照影響了熒光染料的強度,因此探針要避光保存,其已經雜交的片子可用防熒光淬滅劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達到要求,這也直接關系到FISH的穩定性。


如何確保FISH操作中的溫度?


較佳的措施是使用一些FISH的專用儀器進行操作,比如佰泉的原位雜交儀。如果是手工操作,首先要對FISH操作過程中可能使用的一些儀器進行溫控能力的檢查,如水浴鍋、孵箱,對其中不符合要求的要進行更換(疾病診斷中的探針要求溫控精度在0.5度以內)。其次,要盡可能地保持操作環境溫度在20度以上,對于在冬季進行的FISH操作尤為重要。此外對于需要預熱以達到要求溫度的試劑,在使用前必須使用溫度計對其進行測溫。同時檢測的樣本盡量不能超過4塊。操作中的行動一定要迅速。操作者還往往忽視一些小部件的溫度,諸如載玻片和蓋玻片。特別是在冬季,蓋玻片本身溫度就低,加之探針的量本就不多(10ul),因此事先沒有預熱的蓋玻片會使得雜交液的溫度急劇下降嚴重地影響了探針和目標DNA的雜交效率。因此對上述小部件的要進行預熱處理,不然會影響FISH的雜交效果。


FISH 技術作為連接分子生物學與細胞生物學的橋梁地位已為世人所公認。盡管目前FISH技術無法達到完全的雜交,特別是在應用較短cDNA探針時存在雜交效率明顯下降的問題,但隨著各種新型分子探針以及精度更高的光學顯微鏡和功能強大的計算機分析系統的不斷問世,上述問題將會逐步得到解決,該技術的作用正變得日益重要,應用領域也得以不斷擴展。FISH技術在泌尿系統腫瘤研究領域的巨大潛力與光明前景將帶領我們進入全新時代。

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